chloroform là chất làm biến tính protein, tỉ trọng nặng, không tan trong nước, do đó, khi ly tâm, sẽ tách thành 2 lớp, protein bị biến tính sau khi ly tâm sẽ nằm tại mặt phân cách của 2 lớp này.
Isoamylacohol giúp 2 lớp chloroform và dịch nổi rõ hơn, hạn chế tạo bọt.